|
Registro Completo |
|
Biblioteca(s): |
Epagri-Sede. |
|
Data corrente: |
23/11/2020 |
|
Data da última atualização: |
23/11/2020 |
|
Tipo da produção científica: |
Resumo em Anais de Congresso |
|
Autoria: |
KLABUNDE, G. H. F.; PEREIRA, A.; NORA, I. |
|
Título: |
PADRONIZAÇÃO E VALIDAÇÃO DE PROTOCOLO PARA DNA BARCODING DEÁCAROS (ARACHNIDA). |
|
Ano de publicação: |
2020 |
|
Fonte/Imprenta: |
In: CONGRESSO BRASILEIRO DE RECURSOS GENÉTICOS, 6., 2020, Online. Resumos... Brasília: Sociedade Brasileira de Recursos Genéticos, 2020. p. 1-2. |
|
Idioma: |
Português |
|
Conteúdo: |
A correta identificação de ácaros, predadores e pragas, é de extrema importância para a aplicação eficaz dos ácaros predadores como recurso genético e alternativa visando o controle biológico de ácaros-praga em diversas culturas. Em determinadas situações, o uso de caracteres morfológicos é insuficiente para a identificação taxonômica de ácaros. O emprego da técnica de DNA barcoding, baseada no gene mitocondrial Citocromo oxidase, sub-unidade 1 (CO1),permite a identificação precisa das espécies, em complemento aos caracteres morfológicos. Este trabalho objetivou padronizar um protocolo econômico e eficaz de isolamento de DNA e posterior amplificação, sequenciamento do geneCO1 e validação da técnica de DNA barcoding em amostras de ácaro rajado (Tetranychus urticae
). Foram aplicados quatro métodos distintos de obtenção dos ácaros para isolamento de DNA, sendo: (I) Ácaros estocados em álcool 70%,filtrados em filtro de gramatura 80g/m2 e coletados úmidos; (II) Ácaros estocados em álcool 70%, filtrados em filtro de gramatura 80g/m2 e coletados secos overnight; (III) Ácaros estocados em álcool 70%, filtrados em membrana em bomba de vácuo e coletados secos; (IV) Ácaros coletados vivos e acondicionados diretamente em tampão de extração. Nos métodos, I, II e III as amostras foram lavadas 5 vezes em água ultra pura antes das filtrações. O método in house deisolamento de DNA testado foi baseado em proteinase K, alta concentração salina e SDS. O DNA total das extrações foi quantificado via espectrofotometria. Os métodos I e II apresentaram ótima quantidade de DNA isolado, sendo 229 e 682ng/μl, respectivamente. Já os métodos III e IV apresentaram baixas concentrações de DNA total, sendo 3 e 2 ng/μl,respectivamente. O gene mitocondrial Citocromo oxidase, sub-unidade 1 teve sua região parcial amplificada via PCR com o uso dos iniciadores Lep1F e Lep1R. - A banda alvo de 653 pb amplificou em todos os métodos com exceção do método III. Os produtos de PCR foram purificados e sequenciados bidirecionalmente via eletroforese capilar na plataforma ABI 3500. Os eletroferogramas foram analisados e a sequência consenso final foi submetida a uma análise de BLASTn na plataforma NCBI. O resultado da análise de BLASTn para todas as amostras retornou Tetranychus urticae como resultado, com 100% de identidade e E-value de zero. Os resultados indicam os métodos I e II como ideais para o isolamento de DNA de ácaro para posterior amplificação e sequenciamento da região barcode. MenosA correta identificação de ácaros, predadores e pragas, é de extrema importância para a aplicação eficaz dos ácaros predadores como recurso genético e alternativa visando o controle biológico de ácaros-praga em diversas culturas. Em determinadas situações, o uso de caracteres morfológicos é insuficiente para a identificação taxonômica de ácaros. O emprego da técnica de DNA barcoding, baseada no gene mitocondrial Citocromo oxidase, sub-unidade 1 (CO1),permite a identificação precisa das espécies, em complemento aos caracteres morfológicos. Este trabalho objetivou padronizar um protocolo econômico e eficaz de isolamento de DNA e posterior amplificação, sequenciamento do geneCO1 e validação da técnica de DNA barcoding em amostras de ácaro rajado (Tetranychus urticae
). Foram aplicados quatro métodos distintos de obtenção dos ácaros para isolamento de DNA, sendo: (I) Ácaros estocados em álcool 70%,filtrados em filtro de gramatura 80g/m2 e coletados úmidos; (II) Ácaros estocados em álcool 70%, filtrados em filtro de gramatura 80g/m2 e coletados secos overnight; (III) Ácaros estocados em álcool 70%, filtrados em membrana em bomba de vácuo e coletados secos; (IV) Ácaros coletados vivos e acondicionados diretamente em tampão de extração. Nos métodos, I, II e III as amostras foram lavadas 5 vezes em água ultra pura antes das filtrações. O método in house deisolamento de DNA testado foi baseado em proteinase K, alta concentração salina e SDS. O DNA total das extrações foi quantificado... Mostrar Tudo |
|
Palavras-Chave: |
Acari; Barcode Index Number; CO1. |
|
Categoria do assunto: |
O Insetos e Entomologia |
|
|
|
|
Marc: |
LEADER 03188naa a2200181 a 4500
001 1130254
005 2020-11-23
008 2020 bl uuuu u00u1 u #d
100 1 $aKLABUNDE, G. H. F.
245 $aPADRONIZAÇÃO E VALIDAÇÃO DE PROTOCOLO PARA DNA BARCODING DEÁCAROS (ARACHNIDA).$h[electronic resource]
260 $c2020
520 $aA correta identificação de ácaros, predadores e pragas, é de extrema importância para a aplicação eficaz dos ácaros predadores como recurso genético e alternativa visando o controle biológico de ácaros-praga em diversas culturas. Em determinadas situações, o uso de caracteres morfológicos é insuficiente para a identificação taxonômica de ácaros. O emprego da técnica de DNA barcoding, baseada no gene mitocondrial Citocromo oxidase, sub-unidade 1 (CO1),permite a identificação precisa das espécies, em complemento aos caracteres morfológicos. Este trabalho objetivou padronizar um protocolo econômico e eficaz de isolamento de DNA e posterior amplificação, sequenciamento do geneCO1 e validação da técnica de DNA barcoding em amostras de ácaro rajado (Tetranychus urticae ). Foram aplicados quatro métodos distintos de obtenção dos ácaros para isolamento de DNA, sendo: (I) Ácaros estocados em álcool 70%,filtrados em filtro de gramatura 80g/m2 e coletados úmidos; (II) Ácaros estocados em álcool 70%, filtrados em filtro de gramatura 80g/m2 e coletados secos overnight; (III) Ácaros estocados em álcool 70%, filtrados em membrana em bomba de vácuo e coletados secos; (IV) Ácaros coletados vivos e acondicionados diretamente em tampão de extração. Nos métodos, I, II e III as amostras foram lavadas 5 vezes em água ultra pura antes das filtrações. O método in house deisolamento de DNA testado foi baseado em proteinase K, alta concentração salina e SDS. O DNA total das extrações foi quantificado via espectrofotometria. Os métodos I e II apresentaram ótima quantidade de DNA isolado, sendo 229 e 682ng/μl, respectivamente. Já os métodos III e IV apresentaram baixas concentrações de DNA total, sendo 3 e 2 ng/μl,respectivamente. O gene mitocondrial Citocromo oxidase, sub-unidade 1 teve sua região parcial amplificada via PCR com o uso dos iniciadores Lep1F e Lep1R. - A banda alvo de 653 pb amplificou em todos os métodos com exceção do método III. Os produtos de PCR foram purificados e sequenciados bidirecionalmente via eletroforese capilar na plataforma ABI 3500. Os eletroferogramas foram analisados e a sequência consenso final foi submetida a uma análise de BLASTn na plataforma NCBI. O resultado da análise de BLASTn para todas as amostras retornou Tetranychus urticae como resultado, com 100% de identidade e E-value de zero. Os resultados indicam os métodos I e II como ideais para o isolamento de DNA de ácaro para posterior amplificação e sequenciamento da região barcode.
653 $aAcari
653 $aBarcode Index Number
653 $aCO1
700 1 $aPEREIRA, A.
700 1 $aNORA, I.
773 $tIn: CONGRESSO BRASILEIRO DE RECURSOS GENÉTICOS, 6., 2020, Online. Resumos... Brasília: Sociedade Brasileira de Recursos Genéticos, 2020. p. 1-2.
Download
Esconder MarcMostrar Marc Completo |
|
Registro original: |
Epagri-Sede (Epagri-Sede) |
|
