03188naa a2200181 a 450000100080000000500110000800800410001910000230006024501110008326000090019452025790020365300100278265300250279265300080281770000160282570000130284177301520285411302542020-11-23       2020    bl uuuu     u00u1 u    #d1 aKLABUNDE, G. H. F.  aPADRONIZA????O E VALIDA????O DE PROTOCOLO PARA DNA BARCODING DE??CAROS (ARACHNIDA).h[electronic resource]  c2020  aA correta identifica????o de ??caros, predadores e pragas, ?? de extrema import??ncia para a aplica????o eficaz dos ??caros predadores como recurso gen??tico e alternativa visando o controle biol??gico de ??caros-praga em diversas culturas. Em determinadas situa????es, o uso de caracteres morfol??gicos ?? insuficiente para a identifica????o taxon??mica de ??caros. O emprego da t??cnica de DNA barcoding, baseada no gene mitocondrial Citocromo oxidase, sub-unidade 1 (CO1),permite a identifica????o precisa das esp??cies, em complemento aos caracteres morfol??gicos. Este trabalho objetivou padronizar um protocolo econ??mico e eficaz de isolamento de DNA e posterior amplifica????o, sequenciamento do geneCO1 e valida????o da t??cnica de DNA barcoding em amostras de ??caro rajado (Tetranychus urticae ). Foram aplicados quatro m??todos distintos de obten????o dos ??caros para isolamento de DNA, sendo: (I) ??caros estocados em ??lcool 70%,filtrados em filtro de gramatura 80g/m2 e coletados ??midos; (II) ??caros estocados em ??lcool 70%, filtrados em filtro de gramatura 80g/m2 e coletados secos overnight; (III) ??caros estocados em ??lcool 70%, filtrados em membrana em bomba de v??cuo e coletados secos; (IV) ??caros coletados vivos e acondicionados diretamente em tamp??o de extra????o. Nos m??todos, I, II e III as amostras foram lavadas 5 vezes em ??gua ultra pura antes das filtra????es. O m??todo in house deisolamento de DNA testado foi baseado em proteinase K, alta concentra????o salina e SDS. O DNA total das extra????es foi quantificado via espectrofotometria. Os m??todos I e II apresentaram ??tima quantidade de DNA isolado, sendo 229 e 682ng/μl, respectivamente. J?? os m??todos III e IV apresentaram baixas concentra????es de DNA total, sendo 3 e 2 ng/μl,respectivamente. O gene mitocondrial Citocromo oxidase, sub-unidade 1 teve sua regi??o parcial amplificada via PCR com o uso dos iniciadores Lep1F e Lep1R. - A banda alvo de 653 pb amplificou em todos os m??todos com exce????o do m??todo III. Os produtos de PCR foram purificados e sequenciados bidirecionalmente via eletroforese capilar na plataforma ABI 3500. Os eletroferogramas foram analisados e a sequ??ncia consenso final foi submetida a uma an??lise de BLASTn na plataforma NCBI. O resultado da an??lise de BLASTn para todas as amostras retornou Tetranychus urticae como resultado, com 100% de identidade e E-value de zero. Os resultados indicam os m??todos I e II como ideais para o isolamento de DNA de ??caro para posterior amplifica????o e sequenciamento da regi??o barcode.  aAcari  aBarcode Index Number  aCO11 aPEREIRA, A.1 aNORA, I.  tIn: CONGRESSO BRASILEIRO DE RECURSOS GEN??TICOS, 6., 2020, Online. Resumos... Bras??lia: Sociedade Brasileira de Recursos Gen??ticos, 2020. p. 1-2.