03355naa a2200169 a 450000100080000000500110000800800410001910000110006024500940007126000090016552027960017465300110297065300130298165300130299465300210300777301570302810792432011-08-10       2010    bl uuuu     u00u1 u    #d1 aEpagri  aEfeito da evolução técnica na eficiência na clonagem por handmade cloning em bovinos.  c2010  aLaboratórios de pesquisa e empresas comerciais no Brasil produziram muitos clones bovinos nos últimos anos empregando a metodologia clássica de clonagem, não havendo ainda relatos científicos sobre a evolução técnica da clonagem ou do nascimento de produtos utilizando a clonagem manual ou handmade cloning (HMC) no país. O objetivo deste trabalho foi de determinar os efeitos do aumento da experiência técnica na clonagem por HMC sobre as taxas de produção de embriões e estabelecimento de prenhezes em bovinos durante três períodos de atividades (28 meses). Os resultados de produção in vitro de embriões por HMC e o desenvolvimento in vivo subseqüente obtidos em três blocos de sete meses, com intervalos de três meses entre cada período, foram compilados como Períodos 1 (P1), 2 (P2), e 3 (P3). Os embriões bovinos clonados foram produzidos e transferidos para fêmeas receptoras de acordo com a metodologia descrita anteriormente (Gerger et al., Genet Mol Res, 2010, 9:295-302). O dados relativos às taxas de produção de blastocisto, qualidade embrionária (Graus 1-3) e estádio de desenvolvimento (Estádios 5-9), baseados no Manual da IETS (Stringfellow & Seidel, IETS Manual, 1998, 173-176), bem como as taxas de prenhez no Dia 30 de gestação foram comparadas pelo teste do χ2, para p&lt0,05. Um total de 21.231 CCOs foi submetido à maturação in vitro (MIV), com 5.432, 10.721 e 5.078 CCOs utilizados em 16, 18 e 10 rotinas no P1, P2 e P3, respectivamente. O desenvolvimento a blastocisto no Dia 7 aumentou de 15,5% (124/798) no P1, para 21,6% (309/1428) e 36,6% (280/764) no P2 e P3, respectivamente. Um aumento de 10 vezes na probabilidade de se obter blastocistos mais desenvolvidos (Estádios 7 e 8/9) e com melhor qualidade morfológica (Grau 1) ocorreu do P1 ao P3, passando de 5,0% no P1 para 26,7% no P2, culminando em 49,7% no P3. As taxas de prenhez também aumentaram com a evolução técnica nos períodos, sendo de 6,7% (2/30), 20,8% (10/48) e 40,0% (24/60) para P1, P2 e P3, respectivamente. A eficiência relativa para o estabelecimento de prenhezes aos 30 dias, baseada no número total de CCOs utilizados (prenhezes por CCOs), aumentou significativamente de 0,04% (1:2.716) no P1 para 0,22% (1:460) no P2, finalmente alcançando 0,47% (1:212) no P3. Nossos resultados demonstraram uma melhoria significativa e gradual das taxas de desenvolvimento in vitro e in vivo de embriões ao longo do tempo após a clonagem, destacando a importância do ganho de experiência e conhecimentos técnicos sobre a eficiência global da técnica de HMC. Este trabalho também demonstrou a viabilidade da clonagem manual nas nossas condições, que foi traduzida pelo nascimento de uma bezerra clone da raça Nelore no Brasil por HMC em 2008.  aBovino  aClonagem  aEmbrião  aHandmade cloning  tIn: REUNIÃO ANUAL DA SOCIEDADE BRASILERIA DE TECNOLOGIA DE EMBRIÕES, 24., 2010, Porto de Galinhas, PE. Anais... Porto Alegre, RS: UFRGS, 2010. p. 803.