02711naa a2200253 a 450000100080000000500110000800800410001910000190006024501630007926000090024252019100025165300100216165300090217165300090218065300200218965300120220970000170222170000150223870000210225370000210227470000170229570000200231277301250233211264802017-08-08       2017    bl uuuu     u00u1 u    #d1 aMANENTI, D. C.  aLevantamento da condi????o viral de acessos do Banco Ativo de Germoplasma de Macieira da Epagri utilizando m??todos DAS-ELISA e RT-PCR.h[electronic resource]  c2017  aUm dos principais acervos de germoplasma de macieira no Brasil ?? o Banco Ativo de Germoplasma de Macieira da Epagri (BAG-Ma????), localizado em Ca??ador/SC, o qual ?? uma das fontes de variabilidade gen??tica para o Programa de Melhoramento Gen??tico de Macieira da Epagri. Contudo, o BAG-Ma???? n??o est?? totalmente caracterizado quanto ??s caracter??sticas fenot??picas, genot??picas e condi????o fitossanit??ria de seus acessos, o que restringe ou at?? inviabiliza a utiliza????o e interc??mbio desse germoplasma. Dessa forma, o objetivo do trabalho foi realizar a diagnose dos v??rus ASGV, ASPV e ACLSV em alguns dos acessos do BAG-Ma???? utilizando os m??todos DAS-ELISA e RT-PCR. O trabalho foi desenvolvido no Laborat??rio de Biotecnologia da Epagri / Esta????o Experimental de Ca??ador. Foram analisados 27 acessos do BAG-Ma???? para a presen??a dos v??rus ASGV, ASPV e ACLSV. A diagnose foi realizada via teste DAS-ELISA (Double Antibody Sandwich - Enzyme-linked immunosorbent Assay), utilizando os kits completos da Bioreba??, seguindo as indica????es do fabricante, e via t??cnica RT-PCR (Reverse Transcription - Polymerase Chain Reaction). As extra????es de RNA foram realizadas pelo m??todo de adsor????o em s??lica. A s??ntese do cDNA foi realizada utilizando o iniciador reverso para cada v??rus. As rea????es de PCR foram ajustadas a um volume final de 15 ??L. Os produtos de amplifica????o esperados foram 755 pb para o v??rus ASGV (Nickel et al., 2001), 269 pb para o ASPV (Radaelli et al., 2006) e 358 pb para o ACLSV (Candresse et al., 1995), sendo os pares de iniciadores descritos pelos respectivos autores. Os produtos da PCR foram submetidos a eletroforese em gel de agarose a 1,2 % e visualizados sobre luz UV em fotodocumentador Kodak GelLogic 212 Pro. Todos os 27 acessos do BAG-Ma???? da Epagri avaliados apresentam infec????o por pelo menos um dos v??rus ASGV, ASPV e ACLSV.  aACLSV  aASGV  aASPV  aMalus domestica  aviroses1 aSOUTO, E. R.1 aNICKEL, O.1 aKVITSCHAL, M. V.1 aHAWERROTH, M. C.1 aSCHUH, F. S.1 aBRANCHER, T. L.  tIn: ENCONTRO NACIONAL DE FRUTICULTURA DE CLIMA TEMPERADO, 15., 2017, Fraiburgo. Resumos... Ca??ador: Epagri, 2017. p. 48