Data/hora: 06/06/2024 10:36:13

Biblioteca(s): 	Epagri-Sede.	
Data corrente: 	23/11/2020	
Data da última atualização: 	23/11/2020	
Autoria: 	KLABUNDE, G. H. F.; PEREIRA, A.; NORA, I.	
Título: 	PADRONIZAÇÃO E VALIDAÇÃO DE PROTOCOLO PARA DNA BARCODING DEÁCAROS (ARACHNIDA).	
Ano de publicação: 	2020	
Fonte/Imprenta: 	In: CONGRESSO BRASILEIRO DE RECURSOS GENÉTICOS, 6., 2020, Online. Resumos... Brasília: Sociedade Brasileira de Recursos Genéticos, 2020. p. 1-2.	
Idioma: 	Português	
Conteúdo: 	A correta identificação de ácaros, predadores e pragas, é de extrema importância para a aplicação eficaz dos ácaros predadores como recurso genético e alternativa visando o controle biológico de ácaros-praga em diversas culturas. Em determinadas situações, o uso de caracteres morfológicos é insuficiente para a identificação taxonômica de ácaros. O emprego da técnica de DNA barcoding, baseada no gene mitocondrial Citocromo oxidase, sub-unidade 1 (CO1),permite a identificação precisa das espécies, em complemento aos caracteres morfológicos. Este trabalho objetivou padronizar um protocolo econômico e eficaz de isolamento de DNA e posterior amplificação, sequenciamento do geneCO1 e validação da técnica de DNA barcoding em amostras de ácaro rajado (Tetranychus urticae
). Foram aplicados quatro métodos distintos de obtenção dos ácaros para isolamento de DNA, sendo: (I) Ácaros estocados em álcool 70%,filtrados em filtro de gramatura 80g/m2 e coletados úmidos; (II) Ácaros estocados em álcool 70%, filtrados em filtro de gramatura 80g/m2 e coletados secos overnight; (III) Ácaros estocados em álcool 70%, filtrados em membrana em bomba de vácuo e coletados secos; (IV) Ácaros coletados vivos e acondicionados diretamente em tampão de extração. Nos métodos, I, II e III as amostras foram lavadas 5 vezes em água ultra pura antes das filtrações. O método in house deisolamento de DNA testado foi baseado em proteinase K, alta concentração salina e SDS. O DNA total das extrações foi quantificado via espectrofotometria. Os métodos I e II apresentaram ótima quantidade de DNA isolado, sendo 229 e 682ng/&#956;l, respectivamente. Já os métodos III e IV apresentaram baixas concentrações de DNA total, sendo 3 e 2 ng/&#956;l,respectivamente. O gene mitocondrial Citocromo oxidase, sub-unidade 1 teve sua região parcial amplificada via PCR com o uso dos iniciadores Lep1F e Lep1R. - A banda alvo de 653 pb amplificou em todos os métodos com exceção do método III. Os produtos de PCR foram purificados e sequenciados bidirecionalmente via eletroforese capilar na plataforma ABI 3500. Os eletroferogramas foram analisados e a sequência consenso final foi submetida a uma análise de BLASTn na plataforma NCBI. O resultado da análise de BLASTn para todas as amostras retornou Tetranychus urticae como resultado, com 100% de identidade e E-value de zero. Os resultados indicam os métodos I e II como ideais para o isolamento de DNA de ácaro para posterior amplificação e sequenciamento da região barcode.	
Palavras-Chave: 	Acari; Barcode Index Number; CO1.	
Categoria do assunto: 	O Insetos e Entomologia	
URL: 	http://intranetdoc.epagri.sc.gov.br/producao_tecnico_cientifica/DOC_47669.pdf	
Registro original: 	Epagri-Sede (Epagri-Sede)	
Exemplares: 	Epagri-Sede - (105228-1) - UPC - PL - DD -  -  -  - DIS